جهة الاتصال: jerry.he@wecistanche.com

Mi Young Ahn1 * و Ban Ji Kim1 و Ha Jeong Kim1 و Jae Sam Hwang1 و Yi-Sook Jung2 و Kun-Koo Park3

Cistanche له تأثير مضاد للشيخوخة

الملخص

الخلفية: هدفت هذه الدراسة إلى تقييممكافحة الشيخوخةتأثير مركب مشتق من الحشرات محضر حديثًا ، خنفساء الروث جليكوزامينوجليكان (GAG) ، يُعطى داخل الصفاق لفئران SD القديمة كجزء من نظامهم الغذائي لمدة شهر واحد. وجد أن تناول GAG للحشرات يرتبط بانخفاض الضرر التأكسدي ، ومستويات العلامات الحيوية الخلوية الكبدية ، ومحتوى البروتين الكربوني ، وتركيز malondialdehyde. المكافحة الشيخوخة- لم يتم توضيح الآليات الوراثية الجزيئية المرتبطة بخنفساء الروث GAG بشكل كامل بعد.

النتائج: Catharsius molossus (نوع من خنفساء الروث) يمتلك GAG (CaG)مكافحة الشيخوخةأنشطة؛ لقد خفض مستوى الكرياتينين كيناز في الدم ، وكان له أنشطة توسع الأوعية الأورطي وإجراءات حماية القلب ، وحافظ على مستوى الجلوكوز الطبيعي في الفئران المعالجة. تم إجراء تحليل ميكروأري باستخدام مصفوفة مجموعة استنساخ الفئران 30 كيلو كدنا لتحديد ملامح التعبير الجيني 14- لجرذان SD عمرها شهر تم علاجها بخنفساء الروث جليكوزامينوجليكان 5 مجم / كجم (CaG5) على مدى 1- الشهر الذي تم القيام به للتحقيق فيمكافحة الشيخوخةتأثير مقارنة بتأثير أي من Bombus ignitus (نوع من النحل الطنان) ملكة GAG 5 مجم / كجم (IQG5) أو كبريتات شوندروتن 10 مجم / كجم. تميز كل من CaG5 و IQG5 بتأثيرهما المضاد للالتهابات ، مما أدى إلى تثبيط قيم الأحماض الدهنية الحرة وحمض البوليك و sGPT و IL -1 beta و CK. بالإضافة إلى ذلك ، شوهدت تأثيرات مضادة للتخثر ومضادة للتخثر: زاد تركيز العامل 1 (الفيبرينوجين) في بلازما الفئران المعالجة بـ CaG. أظهرت مجموعة الفئران المُعالجة بـ CaG 5- ، مقارنةً بالمجموعة الضابطة ، انتظامًا في 131 جينًا ، بما في ذلك ليبوكالين 2 (Lbp) ومثبط سيرين ببتيداز ، و Kaszal type3 (Spink3) ، و 64 جينًا خاضعًا للتنظيم ، بما في ذلك lysyl oxidase (Lox ) ، سيرين ديهيدراتاز (sds) ، وريتينول ساتوراز (ريتسات).

الخلاصة: تشير بياناتنا إلى أن خنفساء الروث جليكوزامينوجليكان قد تكون علاجًا مفيدًا للفئران المسنة ، مما يشير إلى قدرتها على أنها مادة حيوية علاجية للشيخوخة.

الكلمات الرئيسية: تأثير مضاد للشيخوخة ، خنفساء الروث (Catharsius molossus) ، ملكة B. ignitus ، Glycosaminoglycan

خلفية

تستخدم ، عن طريق تنقية واستخراج وتحديد المكونات النشطة القوية ، كأغذية وظيفية أو الأدوية. أظهرت مقتطفات من خنفساء الروث Catharsius molossus ، الموجودة في الصين ، نشاط تحلل ليفي ملحوظ وتأثيرات مضادة للأكسدة ومضادة لفرط سكر الدم على الفئران التي تغذت على نظام غذائي غني بالدهون [9 ، 10]. انخفض محتوى البروتين كاربونيل في الدم وتركيز malondialdehyde في أنسجة الكبد المعالجة بإيثانول خنفساء الروث أو مستخلص الأسيتون على مدار 1- شهر بشكل ملحوظ مقارنةً بالضوابط [10]. في الآونة الأخيرة ، تم العثور على ببتيد خنفساء الروث Ko-rean ، LLCIALRKK-NH2 ، وهو 9- ببتيد مشتق من Copris tripartitus Coprisin ، لممارسة نشاط مبيد للجراثيم ضد الإشريكية القولونية والنشاط المضاد للميكروبات عن طريق التسبب في تلف شديد للحمض النووي ، مما يؤدي إلى موت يشبه موت الخلايا المبرمج [11]. منتج قمري ، مستخلص كحول B. ignitus Queen (BIQ) لديه أعلى فعالية محتملة بين جميع مستخلصات النحل الطنان التي تم اختبارها لعلاج الالتهاب في فئران SD ، حيث أنه يقلل بشكل كبير من وذمة القدم [12]. لذلك ، قمنا بإعداد GAGs المشتقة من أكبر عدد يمكن الحصول عليه من C. molossus أو B. ignitus queens لاختبارمكافحة الشيخوخةالخصائص. الشيخوخة تنطوي على انخفاض تدريجي في القدرة الفسيولوجية للكائن الحي ، ويتجلى ذلك من خلال التغيرات المتراكمة وزعزعة الاستقرار على مستوى النظام بأكمله [13]. الشيخوخة مرتبطة أيضًا بنمط التعبير الجيني التفاضلي الذي يشير إلى استجابة منخفضة للضغط بين جينات التمثيل الغذائي والجينات الحيوية [14]. على وجه الخصوص ، فإن الزيادة المرتبطة بالعمر أو السمنة في الأنسجة الدهنية الحشوية عادة ما تكون مصحوبة بالتهاب مزمن منخفض الدرجة ، والذي يُفترض أنه سبب لأمراض التمثيل الغذائي المختلفة بما في ذلك السرطان وأمراض القلب والأوعية الدموية ، والأهم من ذلك النوع. داء السكري [15]. يمكن استخدام GAGs الحشرات في مجال سريع التطور مع احتمال استخدام هندسة الأنسجة والمواد الحيوية كعلاجات جديدة [16].

في هذه الدراسة ، أبلغنا عن عرض GAG من خنافس الروث و BIQمكافحة الشيخوخةالخصائص ، وبالتالي ، فإن هذه المركبات تحمل وعودًا كبيرة لاستخدامها كـمكافحة الشيخوخةعملاء. أيضًا ، نوضح القيمة المحتملة لخنفساء روث C. molossus glycosaminoglycan في تقليل الجوانب الضارة للشيخوخة ، كما تم قياسها في كل من المصل وأنماط التعبير الجيني لفئران SD البالغة من العمر {0} شهرًا بعد العلاج لمدة شهر واحد.

طُرق

المواد

تحضير الجليكوزامينوجليكان الحشرة

تم شراء C. molossus المجفف من السوق المحلي في الصين ؛ تمت تربية النحل الطنان (ملكة Bombus ignitus) وتجفيفه بالتجميد ، في قسم البيولوجيا الزراعية ، الأكاديمية الوطنية للعلوم الزراعية ، كوريا الجنوبية. تم الحصول على كبريتات شوندروتن وجميع الكواشف من Sigma Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية).

تم نقع كل حشرة جافة وزنها كيلوغرام واحد (1 كجم) واستخلاصها ثلاث مرات بالإيثانول بالموجات فوق الصوتية (برانسون ، كولورادو ، ميتشيغن ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 3 0 دقائق. تمت إزالة الدهن من البقايا المنفصلة عن المستخلصات الكحولية مرتين باستخدام مجلدين من الأسيتون. تم تعليق ما يقرب من 2 0 0 جم من المسحوق المجفف منزوع الدهن والمسحوق في 2 لتر من 0. 05 مولار من كربونات الصوديوم (درجة الحموضة 9). تم تحضين المعلق لمدة 48 ساعة عند 60 درجة بعد إضافة 28 مل (1.4 بالمائة) من Alcalase (Sigma Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية). يبرد خليط الهضم إلى 4 درجات ، ويضاف حمض ثلاثي كلورو الخليك إلى تركيز نهائي قدره 5 في المائة. تم خلط العينة ، والسماح لها بالوقوف لمدة ساعة واحدة ، ثم طردها بالطرد المركزي لمدة 30 دقيقة عند 8000 × جم (Hanil Science Industrial ، إنتشون ، كوريا الجنوبية). تمت إضافة ثلاثة أحجام من 5 في المائة من أسيتات البوتاسيوم في الإيثانول إلى حجم واحد من المادة الطافية. بعد الخلط ، يتم تخزين المعلق طوال الليل عند 4 درجات ثم طرده بالطرد المركزي. تمت إذابة الراسب البالغ 20 جم في 40 مل من 0.2 مولار كلوريد الصوديوم وطرده بالطرد المركزي. تمت إضافة كلوريد Cetylpyridinium (5 بالمائة) إلى 0.2 ضعف حجم المادة الطافية ، وتم جمع الراسب بالطرد المركزي. تمت إذابة الراسب في 20 مل من 2.5 مول كلوريد الصوديوم. تمت إضافة خمسة أحجام من الإيثانول ، وتم فصل الراسب بالطرد المركزي. تمت إذابة الراسب في الماء وغسيله مقابل 100 حجم من الماء [17] ، وتم تجفيف الجليكوز أمينوغليكان الخام المُحلل بالتجميد للحصول على حوالي 1.1 جم من CaG ، و 4.89 جم من IQG كمسحوق. تم تحميل الخام GAG على عمود كروماتوغرافيا جل DEAE Sephadex A -25 (40 × 1.2 سم) متوازن مع محلول فوسفات 50 ملي مولار (الرقم الهيدروجيني 7.4). تمت التصفية التصفية للكسور باستخدام تدرج خطي لكلوريد الصوديوم من 0 إلى 2.5 مولار كلوريد الصوديوم في محلول الفوسفات بمعدل تدفق 20 مل / ساعة ، وتم تجفيف الجليكان المُحلل بالتجميد إلى GAG نقي.

الحيوانات

تم توريد فئران Sprague Dawley (SD) (ذكور) ، التي يبلغ عمرها 8- شهرًا ، من Samtako Co. Ltd. (Osan ، كوريا). كانت جميع الإجراءات متوافقة مع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام حيوانات المختبر. تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل اللجنة الأخلاقية لحيوانات المختبر التابعة للأكاديمية الوطنية للعلوم الزراعية ، RDA ، كوريا الجنوبية (NAAS1503) واتبعت الإرشادات الوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات (السكن الفردي). تم تأقلم الفئران لمدة 6 أشهر في ظل ظروف التربية العادية (23 ± 2 درجة مئوية ، و 55 ± 10 في المائة من الرطوبة و 12 ساعة في دورة الضوء / الظلام) وتغذت على نظام غذائي عادي (D10001 ، AIN -76 نظام غذائي للقوارض ، بحث دايت إنك ، نيو برونزويك ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) و libi ad libi. تم فصل الفئران البالغة من العمر {11} شهرًا إلى 4 مجموعات معالجة كل منها 10 فئران وتم توزيعها وفقًا للتشابه في الوزن (680.2 ± 9.20 جم). أعطيت المعالجات في برنامج تلفزيوني يومياً وتم إعطاء كل منها داخل الصفاق.

كانت المجموعات تحكم ، 5 مجم / كجم CaG (CaG5) ، 5 مجم / كجم IQG (IQG5) ، و 10 مجم / كجم CS (CS10) (شركة Sigma Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، معطى. تم الحفاظ على كل مجموعة على النظام الغذائي العادي (AIN -76 نظام غذائي للقوارض ، حمية بحثية) وعينة علاج لمدة شهر واحد (المخطط 1).

أوزان الأنسجة الدهنية

تم تحديد نسب الدهون في البطن والبربخ إلى وزن الجسم. كانت القياسات بعد التضحية في نهاية فترة العلاج 1- شهر.

كثافة الخلايا الشحمية

تم إصلاح الأعضاء المستأصلة والأنسجة الدهنية بنسبة 10 بالمائة من الفورمالين المحايد. بعد تضمين البارافين ، تم تلطيخهم بالهيماتوكسيلين والأيوزين ، والتولويدين الأزرق O ، تم فحصهم بواسطة المجهر الضوئي (لايكا CTR6000 ، هيس ، ألمانيا) ، وتم تصويرهم. تم تحديد كثافة الخلايا الشحمية (الخلايا / مم 2) في الأنسجة المعالجة والمراقبة بواسطة صبغة O O (التكبير الأصلي ، x400).

أخذ عينات الدم والدم والبلازما وفحص المصل

في أربع مجموعات تسمى CON ، CaG5 ، IQG5 ، CS10 (ن =10) ، بعد شهر واحد من العلاج ، تم جمع الدم (حوالي 5 مل) من الوريد الأجوف الخلفي تحت استنشاق خفيف لثاني أكسيد الكربون واستخدمت في قياسات كيمياء المصل. تضمنت البارامترات التي تم فحصها الفوسفوليبيد ، حمض الهيالورونيك ، الأحماض الدهنية الحرة ، الألبومين ، الفوسفاتيز القلوي (ALP) ، ترانس أميناز الجلوتاميك أوكسالوسيتيك (GOT) ، ترانساميناز الجلوتاميك بيروفيك (GPT) ، نازعة هيدروجين اللاكتيك (LDH) ، CK (الكرياتينين الفوسفوكيناز). ، الكوليسترول الكلي ، الدهون الثلاثية ، كوليسترول HDL ، كوليسترول LDL ، الكرياتينين ، نيتروجين اليوريا في الدم (BUN) ، البروتين الكلي ، حمض البوليك ، والبروتين التفاعلي (CRP). تم تقييم جميع المعلمات باستخدام محلل تلقائي (المحلل السريري التلقائي Hitachi 7060 ، طوكيو).

أخذ عينات الدم ومقايسة البلازما للكشف عن النشاط المضاد للتخثر

بعد العلاج لمدة {0} شهر ، تم جمع ما يقرب من 4 مل من البلازما من الوريد الأجوف الخلفي تحت استنشاق خفيف لثاني أكسيد الكربون وطرده من المركز. تم استخدام المادة الطافية لوقت التخثر كاختبار نشاط مضاد للتخثر: وقت الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط (APTT) ، ووقت الثرومبين ، ووقت البروثرومبين ، والعامل 1 (الفيبرينوجين) كمقايسة نشاط الفبرين باستخدام محلل سريري تلقائي مذكور أعلاه وفقًا لدليل جرين كروس لاب.

تلف الدهون التأكسدية

لتحديد الضرر المؤكسد للدهون في الخلايا الكبدية للفئران ، تم قياس مستويات malondialdehyde (MDA) بمقايسة بيروكسيد الدهون باستخدام طريقة اللون التي تتضمن المواد المتفاعلة لحمض الثيوباربيتوريك (TBARS) عند 535 نانومتر [18].

تلف البروتين التأكسدي

تم استخدام المواد الطافية المتجانسة للكبد والدم ، التي تم الحصول عليها بعد الطرد المركزي لتحديد محتوى الكربونيل. تم تقييم الإجهاد التأكسدي للبروتين عن طريق قياس محتوى البروتين الكربوني في الدم. تم تحديد محتوى الكربونيل بمقايسة مناعية مرتبطة بالإنزيم وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة لمجموعة كربونيل ELISA بروتين OxiSelect ™ (Cell Biolabs ، Inc. ، San Diego ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم قياس نشاط CAT (U / mg بروتين) بناءً على التحلل بواسطة CAT بوساطة H2O2 [19].

تحضير متجانس الكبد للكشف عن الإنزيم المؤكسد

حوالي أربع مجموعات تسمى CON ، CaG5 ، IQG5 ، CS10 ، تم تجانس أنسجة الكبد على الجليد في 10- محلول استخلاص البروتين PRO-PREP ™ (iNtRON ، بوسان ، كوريا). تم اختبار طاف تجانس الكبد بعد الطرد المركزي (800 جم ، 10 دقائق) من أجل الكاتلاز ، الجلوتاثيون بيروكسيديز ، الجلوتاثيون إس ترانسفيراز وسوبروكسيد

نشاط ديسموتاز وفقًا لدليل الفحص (OxiSelect ™ ELISA kit ، Cell BioLabs ، InC. ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية).

مقايسة Cytokine IL -1 و IL -6 و IL -10

في أربع مجموعات مسماة CON ، CaG5 ، IQG5 ، CS10 ، IL - 1 أو IL - 6 أو IL - 10 في مصل الفئران المعالَج بـ GAG للحشرات ، تم قياسها باستخدام مجموعات Elisa التجارية (Quanti- kine ، R&D Systems ، Inc ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة.

إعداد الحمض النووي الريبي والتحليل الكمي في الوقت الحقيقي PCR

تم عزل RNA الكلي من الكبد باستخدام كاشف TRIzol (Invitrogen ، Carlsbad ، CA ، USA) ، وتم قياس تركيز RNA ونقاوته باستخدام مقياس الطيف الضوئي UV / Vis (شركة Beckman Coulter ، ميامي ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تصنيع الحمض النووي التكميلي (cDNA) من 1 جرام من إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة النسخ العكسي (كدنا) عالية السعة (Amersham Biosciences Co. ، Piscataway ، NJ ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) باستخدام Power SYBR Green Master Mix باستخدام 7500 Real-Time PCR System (كلاهما من Applied Biosystems) ، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. للكشف عن نسخ الجينات المستهدفة ، قمنا بتصميم بادئات قليلة النوكليوتيد للأمام والخلف على وجه التحديد باستخدام برنامج Beacon Designer (PREMIER Biosoft ، Palo Alto ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم سرد تسلسلات التمهيدي في المخطط 2. تم تطبيع مستويات mRNA المستهدفة باستخدام glyceraldehyde 3- نازع هيدروجين الفوسفات (GAPDH) كعنصر تحكم داخلي لتأهيل التعبير النسبي لمرنا الهدف وفقًا لطريقة عتبة ركوب الدراجات. وقد تم تحليل جميع العينات في ثلاث نسخ.

تسلسل تمهيدي لتضخيم الجينات المشاركة في آلية إصلاح الخلية والمعيار الداخلي GAPDH (مخطط 2).

إجراء ميكروأري الحمض النووي

بعد تحليل التشريح المرضي ، تم إجراء تهجين ميكروأري على عينات الكبد [2 0]. تم عزل Total RNA من أنسجة الكبد باستخدام Qiagen RNeasy Midi Kit (Qiagen ، فالنسيا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم استخدام مجموعة ملصقات FairPlay ™ microarray (ستراتاجين ، لا جولا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تحميل الحمض النووي المسمى على شريحة ميكروأري. تم تجميع غرفة التهجين بشريحة ميكروأري ، Rat Genome 230 2. 0 Array (Affymetrix Inc.، Santa Clara ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، وتم غمرها في حمام مائي طوال الليل عند 60 درجة. تم غسل رقاقة ميكروأري في المخزن المؤقت للغسيل I ، وغسل المخزن المؤقت II ، ثم غسل المخزن المؤقت III لمدة 5 أو 15 دقيقة. تم تجفيف الشريحة بالطرد المركزي عند 500 جم لمدة 15 دقيقة وتم مسحها ضوئيًا باستخدام BMS Array Scanner ، تطبيق الدقة Array Worx eBiochip Reader (BioRad ، دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، باستخدام قناتي Cy3 و Cy5 [21].

تحليل قلب الفئران المعزول

تم تخدير ذكور فئران سبراج-داولي التي يبلغ وزنها 350 ± 50 جم باستخدام بنتوباربيتال (100 مجم / كجم). تم حقن وريد الذيل بالهيبارين (1000 وحدة / كجم) ، ثم تم تنبيب القصبة الهوائية. بينما تم تهوية الفئران ميكانيكيًا بجهاز التنفس الصناعي للقوارض (موديل 7025 ؛ أوغو باسيلي ، كومريو-فاريزي ، إيطاليا) ، تم ترطيب قلوبهم في الموقع باستخدام محلول بيكربونات Krebs-Henseleit المعدل المؤكسج عن طريق إدخال القنية الأبهرية إلى الوراء. تم بعد ذلك استئصال القلوب ونقلها إلى جهاز Langendorff (Hugo Sachs Electronik ، March-Hugstetten ، ألمانيا) ، حيث تم ترطيبها بمحلول بيكربونات Krebs-Henseleit المعدل المؤكسج عند ضغط نضح ثابت يبلغ 75 مم زئبق. تم إدخال بطين لاتكس مملوء بالماء من خلال الوريد الرئوي وتم توصيله بمحول ضغط Isotec (Hugo Sachs Electronik) لقياس ضغط البطين الأيسر (LVP). تم السماح للقلوب بالتوازن لمدة 15 دقيقة ، وفي ذلك الوقت تم تعديل ضغط نهاية البطين الأيسر (EDP) إلى 10 مم زئبق ، وتم الحفاظ على حجم البالون هذا طوال التجربة. ثم ، وظيفة الانقباض الأساسية ، ومعدل ضربات القلب ، والتدفق التاجي (مسبار التدفق الكهرومغناطيسي خارج الجسم ؛ أنظمة المخدرات الحيوية ، هيوستن ،

TX ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم حساب وظيفة انقباض القلب عن طريق طرح LVEDP من ذروة الضغط الانقباضي LV (LVSP) ، مما أدى إلى الضغط المتطور (LVDP). بعد الموازنة لمدة ساعة واحدة ، تمت معالجة حلقات الأبهر بمركبة (محلول ملحي) أو CaG (1 0 ميكروغرام / مل ، 100 ميكروغرام / مل) 10 دقائق قبل حدوث الانكماش بواسطة فينيليفرين 1 ميكرومتر. بعد ذلك ، تم إحداث الاسترخاء المعتمد على البطانة بواسطة الأسيتيل كولين (0.1-100 ميكرومتر) [22].

تحليل احصائي

تم تحديد المتوسطات والخطأ المعياري لجميع المعلمات المدروسة لكل مجموعة باستخدام اختبار ANOVA. تم إجراء اختبار t للطالب لتحديد الفروق المهمة بين المجموعات الضابطة والمجموعات المعالجة. قيمة p<0.05 was="" considered="">

نتائج

تغيرات وزن الجسم والدهون الدهنية

لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في متوسط ​​وزن الجسم بين مجموعات العلاج (الشكل 1). خلال فترة الإدارة التي تبلغ 1- شهرًا ، كانت أوزان أجسام ذكور الجرذان المسنة قابلة للمقارنة في المجموعة الضابطة والمجموعات المعالجة بـ CaG و IQG و CS. يعرض الشكل 2 أ متوسط ​​أوزان الجسم الأسبوعية: CON، 685.16 ± 9.14 جم ؛ CaG5 ، 659.54 ± 14.21 جم ؛ IQG5 ، 646.5 0 ± 11.56 جم ، و CS1 0 ، 662.93 ± 7.82 جم. انخفض متوسط ​​كمية الدهون في منطقة البطن بشكل ملحوظ في مجموعتي IQG5 و CS10 مقارنة بمجموعة التحكم: 21.84 ± 7.46 جم لمجموعة التحكم ؛ 20.66 ± 8.47 جم لـ CaG5 ؛ 16.56 ± 5.97 جم لـ IQG5 (IQG5 مقابل CON ، p <0.05) ؛="" و="" 16.93="" ±="" 5.17="" جم="" لـ="" cs10="" (cs10="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05) (الشكل="" 2="" أ).="" كما="" انخفضت="" دهون="" البربخ="" بشكل="" ملحوظ="" في="" مجموعتي="" iqg5="" و="" cs10="" مقارنة="" بمجموعة="" التحكم:="" 10.38="" ±="" 2.58="" جم="" للتحكم.="" 8.19="" ±="" 4.="" 00="" جم="" لـ="" cag5="" ؛="" 7.="" 00="" ±="" 1.35="" جم="" لـ="">

(IQG5 مقابل CON، p <0. 0="" 5)="" ؛="" و="" 8.56="" ±="" 2.53="" جم="" لـ="" cs10="" (cs10="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05) (الشكل="" 2="">

كثافة الخلايا الشحمية

تم تقليل كثافة الخلايا الشحمية [عدد الخلايا / المنطقة (مم 2)] لأنسجة كبد الفئران المعالجة بـ GAG في HFD ، وفقًا لتقييم تلطيخ O2 الأزرق التولويدين ، بواسطة CaG5 (33. 00 ± 1.73) ، IQG5 (45 . 00 ± 4.36) ، أو CS1 0 (26. 00 ± 2.52) (CS10 مقابل CON ، p <0.05) عند مقارنتها بعنصر التحكم (51. 00 ± 5.29) (الشكل 2 ب).

تغيرات في ضغط الدم ومعدل ضربات القلب

لم يلاحظ وجود فروق ذات دلالة إحصائية في ضغط الدم (ضغط الدم الانقباضي أو معدل ضربات القلب) بين المجموعات المعالجة بـ 5 مجم / كجم من CaG أو IQG أو CS ومجموعة التحكم (البيانات غير معروضة).

أمراض الدم وكيمياء الدم

لوحظت بعض التغييرات المعتمدة على الجرعة بين مجموعات العلاج ومجموعة المراقبة فيما يتعلق بالمعلمات الدموية التي تم فحصها في نهاية التجربة. كانت هناك زيادة بنسبة 27.5 بالمائة في APTT (ثانية) في المجموعة المعالجة CaG 5-: CON، 35.68 ± 5.68؛ CaG5 ، 45.49 ± 1 0 .91 ؛ IQG5 ، 29.93 ± 3.57 ؛ CS1 0 ، 36.83 ± 23.95 (الشكل 3). كان وقت الثرومبين (ثانية) على النحو التالي: CON، 40.18 ± 2.04؛ CaG5 ، 42.13 ± 3.23 ؛ IQG5 ، 36.15 ± 6.67 ؛ CS10، 45.02 ± 21.89. كان هناك زيادة ملحوظة (62.6 بالمائة) في العامل الأول (الفيبرينوجين ، ملجم / ديسيلتر) في CaG 5- المجموعة المعالجة: CON، 429.33 ± 142.22؛ CaG5 ، 698.29 ± 120.28 (CaG5 مقابل CON ، ف <0.05) ؛="" iqg5="" ،="" 627.14="" ±="" 160.67="" ؛="" cs10="" ،="" 790.="" 00="" ±="" 274.22="" (cs10="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05). كان="" زمن="" البروثرومبين="" (ثانية)="" كالتالي:="" con،="" 62.="" 86="" ±="" 47.30؛="" cag5="" ،="" 52.71="" ±="" 4.96="" ؛="" iqg5="" ،="" 52.14="" ±="" 5.58="" ؛="" cs10="" ،="" 55.="" 00="" ±="">

الكيمياء الحيوية في المصل

في الأمصال من المجموعتين المعالجتين بـ IQG و CS (الجدول 1) ، كانت مستويات الفسفوليبيد (مجم / ديسيلتر) أقل بكثير من مصل الشاهد بعد شهر واحد في الجرذان المسنة: CON، 271.78 ± 91.74؛ CaG5 ، 233.67 ± 71. 0 ؛ IQG5، 173.2 ± 32. {{2 0} 2 (IQG5 مقابل CON، p <0. 05)="" ؛="" cs10="" ،="" 259.7="" ±="" 57.27="" (cs10="" مقابل="" con="" ،="" ف=""><0.05). انخفضت="" مستويات="" الأحماض="" الدهنية="" الحرة="" (μeq="" l):="" con،="" 686.78="" ±="" 104.67؛="" cag5="" ،="" 431.33="" ±="" 66.22="" (cag5="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05) ؛="" iqg5،="" 405.6="" ±="" 63.39="" (iqg5="" مقابل="" con،=""><0.05); cs10,="" 566.9="" ±="" 115.38="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). also,="" serum="" gpt="" (alt)="" levels="" (iu/l)="" in="" the="" cag-="" and="" iqg-="" treated="" groups="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" control="" group="" in="" aged="" rats:="" con,="" 76.33="" ±="" 40.21;="" cag5,="" 36.78="" ±="" 8.0="" iu/l;="" iqg5,="" 43.22="" ±="" 13.86="" (iqg5="" vs.="" con,p="" <="" 0.05);="" cs10,="" 53.44="" ±="" 11.36="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). fur-="" thermore,="" the="" mean="" creatinine="" phosphokinase="" (ck="" u/l)="" level="" in="" the="" cag-treated="" group="" was="" lower="" than="" that="" in="">

المجموعة الضابطة في الجرذان المسنة: CON، 125.78 ± 91.66؛ CaG5، 1 {{1 0}} 2.89 ± 65.73 (CaG5 مقابل CON، p <0. 05)="" ؛="" iqg5="" ،="" 91.22="" ±="" 24.74="" ؛="" cs10="" ،="" 131.2="" ±="" 62.56.="" انخفض="" متوسط="" ​​الجلوكوز="" في="" الدم="" (ملغ="" ديسيلتر)="" بشكل="" ملحوظ="" في="" الفئران="" المسنة="" (كل="" مجموعة="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05): con="" ،="" 435.11="" ±="" 105.42="" ؛="" cag5="" ،="" 304.0="" ±="" 44.44="" ؛="" iqg5="" ،="" 275.9="" ±="" 43.18="" ؛="" cs10="" ،="" 317.8="" ±="">

كان متوسط ​​مستوى الكوليسترول الكلي (مجم / ديسيلتر) في المجموعة المعالجة بـ IQG أقل منه في المجموعة الضابطة في الجرذان المسنة ، وكان هذا الاختلاف مهمًا أيضًا: CON، 212.67 ± 92.82؛ CaG5 ، 181.44 ± 68.4 ؛ IQG5، 124.1 ± 23.6 (IQG5 مقابل CON، p <0. 05)="" ؛="" cs10="" ،="" 198.9="" ±="">

بالإضافة إلى ذلك ، كانت مستويات الدهون الثلاثية (mg / dL) كما يلي: CON، 2 0 7.89 ± 1 0 1.95؛ CaG5 ، 136.22 ± 61.6 ؛ IQG5، 1 0 3.3 ± 35.59 (IQG5 مقابل CON، p <0. 0="" 5)="" ؛="" cs10="" ،="" 183.4="" ±="" 104.74.="" انخفضت="" مستويات="" الكوليسترول="" الضار="" (ملغم="" ديسيلتر):="" con،="" 74.67="" ±="" 44.91؛="" cag5="" ،="" 69.0="" ±="" 31.3="" ؛="" iqg5،="" 41.44="" ±="" 10.14="" (iqg5="" مقابل="" con،="" p=""><0.05) ؛="" cs10="" ،="" 65.22="" ±="" 18.52.="" لوحظ="" انخفاض="" كبير="" في="" مستوى="" حمض="" اليوريك="" (ملغ="" ديسيلتر)="" في="" جميع="" المجموعات="" المعالجة="" بـ="" gag="" مقارنةً="" بمجموعة="" التحكم="" (كل="" مجموعة="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05): con="" ،="" 10.9="" ±="" 2.26="" ؛="" cag5="" ،="" 8.12="" ±="" 1.48="" ؛="" iqg5="" ،="" 6.49="" ±="" 0.89="" ؛="" cs10="" ،="" 8.14="" ±="" 2.17="" ،="" الجدول="">

تقليل الضرر التأكسدي

تم تقييم Malondialdehyde (MDA ، nmol / ml) بعد شهر واحد من كل علاج GAG [CON ، 252.9 ± 13.1 ؛ CaG5 ، 175.1 ± 5.8 (انخفاض بنسبة 30.32 بالمائة). كل علاج GAG وكبريتات شوندروتن قلل من بيروكسيد الدهون في خلايا الكبد (الشكل 4 أ). انخفض تركيز كاربونيل البروتين في الدم بنسبة 68.52 بالمائة و 36.89 بالمائة و 53.70 بالمائة في GaG5 و IQG5 و CS10 على التوالي (الشكل 4 ب). ولكن ، لم يكن لكل GAG فروق ذات دلالة إحصائية مقارنة مع التحكم في محتوى كاربونيل خلايا الكبد (البيانات غير معروضة).

الإنزيم المؤكسد (الكاتلاز ، GPx ، GST ، SOD)

كان نشاط الكاتلاز (مجم بروتين / دقيقة) في خلايا الكبد بعد شهر واحد من علاج GAG كما يلي: CON، 17.72 ± 2.81؛ CaG5 ، 19.87 ± 3.88 ؛ IQG5 ، 17.22 ± 4.55 ؛ CS1 0 ، 19.23 ± 3.55. زاد نشاط الكاتلاز في جميع مجموعات خلايا الكبد المعالجة بـ CaG. ديسموتاز الأكسيد الفائق (SOD) هو إنزيم الجذور الحرة (سوبر أكسيد) الكسح. زاد نشاط SOD (nmol / min / ml) في مجموعات المعالجة مقارنةً بمجموعة التحكم: مجموعة التحكم ، 381.44 ± 85.32 ؛ CaG5، 4 0 0.56 ± 60.62 ؛ IQG5 ، 386.72 ± 69.22 ؛ CS10 ، 513.05 ± 60.07. تم زيادة نشاط الجلوتاثيون بيروكسيديز (وحدة / مجم بروتين) في مجموعة خلايا الكبد المعالجة بـ CaG بشكل ملحوظ من خلال العلاج (CaG5 مقابل CON ، p <0.05) ،="" ونشاط="" الجلوتاثيون="" s-="" ترانسفيراز="" (nmol="" min="" ml)="" في="" تم="" أيضًا="" زيادة="" مجموعة="" cag="" بشكل="" ملحوظ="" مقارنةً="" بالمجموعة="" الضابطة="" (cag5="" مقابل="" con="" ،="" p=""><0.05) (الجدول="">

إنتاج Cytokine IL -1 و IL -10

لوحظت زيادات في مستويات IL -10 في المجموعة المعالجة بـ CaG. تم تخفيض مستويات IL -1 (ميكروغرام / مل) في المصل بمقدار 1

الجدول 1 النتائج المصلية للفئران المسنة المعالجة بـ CaG أو IQG لمدة شهر واحد

شهر من علاج CaG أو IQG ، مما يدل على الإجراءات المضادة للالتهابات للمركبات: التحكم ، 251.3 ± 7 0 .7 ؛ CaG5 ، 102.9 ± 9.5 ؛ IQG5 ، 110.4 ± 5.2 ؛ CS10 ، 110.4 ± 10.1 (كل مجموعة مقابل CON ، ف <0.05). تمت="" زيادة="" نشاط="" il="" -10="" (ميكروغرام="" مل)="" بعد="" شهر="" واحد="" من="" علاج="" الكالسيوم="" في="" الفئران:="" con،="" 34.9="" ±="" 11.5؛="" cag5="" ،="" 67.4="" ±="" 13.3="" (cag5="" مقابل="" con="" ،=""><0.05); iqg5,="" 55.5="" ±="" 24.7;="" cs10,="" 28.0="" ±="" 3.8="" (fig.="" 5).="" the="" il-10="" levels="" in="" the="" cs10="" group,="" was="" statistically="" different="" from="" that="" in="" the="" con="" group="" (cs10="" vs.="" con,p=""><>

التعبير الجيني عن طريق التحليل الكمي في الوقت الحقيقي PCR

The data represented that PCR cycle required number (Ct value) when the concentration of PCR amplicon are equilibrated by sample amplicon. Median CT values of 5 sample's represented, but there was no difference from the control group (Ct vale >2. 0) على تسلسل التمهيدي المستخدم (البيانات غير معروضة).

ميكروأري الحمض النووي

تم إجراء تحليل ميكروأري باستخدام مصفوفة استنساخ Mouse 28 K (كدنا) من أجل تحديد ملفات تعريف التعبير الجيني في كبد الفئران SD المعالجة بـ CaG و IQG و CS 15- منذ شهر ، ولتوفير معلومات عن الإمكانياتمكافحة الشيخوخةعلامات.

مقارنة بالمجموعة الضابطة ، أظهرت مجموعة CaG5 2- إلى 4- زيادة أضعاف في 118 جينًا ، و 4- 8- ضعفًا في 11 جينًا ، وأكثر من 8- ضعفًا زيادة في 2 جين. ظلت مستويات التعبير عن الجينات المتبقية ~ 30 ، 000 كما هي. تم تقليل تنظيم ستين جينًا من 2- إلى 4- ضعفًا ، وأظهر 4 جينًا انخفاضًا من 4- إلى 8- ضعفًا.

في مجموعة IQG5 بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، زاد 162 جينًا بنسبة 2- إلى 4- أضعاف ، وزادت 10 جينات بنسبة 4- إلى 8- أضعاف ، وازدادت 3 جينات بمقدار أكثر من 8- أضعاف. من ناحية أخرى ، تم تخفيض 66 مرة بواسطة 2- إلى 4- ضعفًا و 7 تم تقليلها بمقدار 4- إلى 8- ضعفًا.

الجدول 2 أنشطة إنزيم مضادات الأكسدة لخنفساء الروث غليكوزامينوجليكان في كبد الفئران المسن

في مجموعة CS10 مقارنةً بالمجموعة الضابطة ، تم تنظيم 63 جينًا بنسبة 2- إلى 4- أضعاف ، وزاد جينان بنسبة 4- إلى 8- أضعاف ، وتم تنظيم اثنين من الجينات بأكثر من 8- ضعف. تم تقليل تنظيم ثمانية وثلاثين جينًا بواسطة 2- إلى 4- ضعفًا ، وتم تقليل تنظيم 4 جينًا بمقدار 4- إلى 8- ضعفًا ، وانخفض 4 جينًا بأكثر من 8- ضعفًا.

عند مقارنته بمجموعة التحكم ، زاد جين lipocalin2 (Lcn2) بنحو 10- ضعف في نسيج الكبد المعالج CaG 5- ، 46- أضعاف في مجموعة IQ5 ، و {{6} } في المجموعة CS1 0. في أنسجة الكبد للفئران المعالجة بـ CaG 5- ، تم تقليل تنظيم lysil oxidase (Lox) بنسبة 0.13 ، أي انخفض التعبير الجيني. أظهرت مجموعة الفئران المعالجة CaG5 ، مقارنةً بمجموعة التحكم ، أن 131 جينًا بما في ذلك ليبوكالين 2 ، وبروتين ربط قليل السكاريد (Lbp) ، ومثبط سيرين ببتيداز ، وكاسزال من النوع 3 (Spink3) تم تنظيمها (الجدول 3) و 64 جينًا بما في ذلك ليسيل أوكسيديز (Lox) ، تم تنظيم سيرين ديهيدراتاز (sds) ومشبع الريتينول (تراجع) (الجدول 4). أظهرت المجموعة المعالجة CaG 5- ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، تنظيمًا صعوديًا لـ 131 جينًا ، بما في ذلك ليبوكالين 2 ، وبروتين ربط قليل السكاريد (Lbp) ، ومثبط سيرين ببتيداز كاسزال من النوع 3 (Spink3) (الجدول 3) ) وتقليل تنظيم 64 جينًا ، بما في ذلك ليسيل أوكسيديز (Lox) ، سيرين ديهيدراتاز (sds) ، وتشبع الريتينول (Retsat) (الجدول 4). تشير هذه البيانات إلى الليبوكالين 2 والأديبوكينات ، كجينات منتظمة ، وأوكسيداز ليسيل (المرتبط بهيباراناز) ، كجينات خاضعة للتنظيم ، كواسمات علاجية محتملة تعمل ضد الشيخوخة والسمنة

توصيف CaG

تم تحديد تركيبات السكريات الأحادية الأمينية والحمضية والمحايدة من GaG بواسطة GC-MS (الجدول 5). السكريات الأحادية الأمينية الأولية لـ CaG هي بالترتيب التالي: D-glucosaminic acid> N-acetyl-galactosa- mine> N-acetyl-D-gactosaminitol> galactosamine HCl> galactosaminic acid> galactosamine> glucuronic acid. أيضًا ، السكريات الأحادية المحايدة الموجودة في CaG هي بشكل أساسي - الجلوكوز والمانيتول ، في حين أن الصغرى تشمل أرابينوز ورامنوز.

مؤشرات حماية القلب

في هذه التجربة ، قمنا بتمييز التأثير المباشر لـ CaG على الشرايين المقاومة باستخدام الأوعية المحتضنة في المختبر مع الانكماش الناجم عن الفينيليفرين والاسترخاء الناجم عن الأسيتيل كولين. تم تقييم CaG كعامل وقائي للقلب. تم تحويل منحنى التركيز والاستجابة لـ CaG إلى أسفل مقارنةً بالمنحنى الذي شوهد بعد علاج التحكم (PBS فقط) ، مما يدل على أن تحفيز القلب حدث بطريقة تعتمد على التركيز (الشكل 6).

مناقشة

الشيخوخة هي عملية التدهور التدريجي في القدرة الفيزيولوجية والمنطقية للكائن الحي ، ويتجلى ذلك من خلال التغيرات المتراكمة وزعزعة الاستقرار على مستوى النظام بأكمله [13]. يُعتقد أن الجليكوزامينوجليكان يقلل من الآثار الضارة للشيخوخة عن طريق منع تدمير الغضاريف والعظام والأقراص والجلد [23] ونظام الأوعية الدموية [8] وما إلى ذلك. مؤخرًا ، هناك نوع من GAG كمواد متعددة الوظائف ، أو تعتبر حاليًا واحدة من المتوافقة الحيوية والمتوافقة مع الدم

تقدم المواد الحيوية علاقة هائلة بالهيكل والخصائص مثل تثبيت الهيبارين على طعوم البولي يوريثين المعدلة بالكيتوزان بخصائص مضادة للالتصاق ومضادة للميكروبات [24]. في الوقت الحاضر ، أتاح ظهور التحكم في درجة الحرارة تصميم أنظمة تربية الحشرات على نطاق واسع. لذلك ، الجليكوزامينوجليكان

يمكن الحصول عليها من قشرة الحشرة كبقايا مستخلص كحول. تمت دراسة مثل هذه العقاقير الخام من خنافس الروث و B. ignitus queens في محاولة لتحديد مكوناتها النشطة أو لجعل المستخلصات أكثر أمانًا للاستخدام البشري. تمت تنقية خنفساء الروث C. molossus لإنتاج ثنائيات N-acetyl- dopamine ، molossusamide AC (1-3) ، مما يدل على

نشاط مثبط لـ COX {0}} و COX -2 [25] ؛ الشيتوزان [26] ؛ الميلانين [27] ؛ وسيرين بروتياز [9 ، 28]. تبين أن مستخلص النحل الطنان (Bombus ignitus) يحتوي على سم النحل سيرين بروتياز [29] ، بيروكسيريدوكسين [30] ، وبروتين التعرف على الببتيدوغليكان (PGRP-S) [31].

تضمنت استراتيجيات منع الشيخوخة أو تأخيرها تناول مضادات الأكسدة لإصلاح التلف الخلوي التأكسدي للحمض النووي والبروتينات والدهون ، بالإضافة إلى تجديد الأنسجة بواسطة الخلايا الجذعية والعلاج الجيني [32]. كعلامة ضرر مؤكسد للدهون في حالات الإجهاد التأكسدي للدهون في خلايا الكبد ، تم تقليل malondialdehyde بواسطة علاج CaG. أيضًا ، انخفض محتوى الكربونيل في الدم ، وخاصة العدلات ، من خلال علاج CAG وأظهر إصلاح تلف البروتين المؤكسد الخلوي.

يتكون الجليكوزامينوجليكان من C. molossus و B. ignitus queens بشكل أساسي من حمض الجلوكوزامينيك D باعتباره أحادي السكاريد الحمضي و N-acetyl-galactosaminitol كأمينو

أحادي السكاريد ، إلى جانب الجلوكوز و D-mannitol مثل السكريات الأحادية المحايدة. وبالتالي ، يمكن للمركب الوصول إلى مستقبلات غشاء الخلية ويمكنه منع أسباب الأمراض المرتبطة بالشيخوخة عن طريق تغيير استقلاب الطاقة. يمكن للجليكوزامينوجليكان إصلاح الأنسجة الضامة [23] ، وتآكل الغضاريف والأقراص والعظام والبروتينات السكرية على المستوى الجزيئي ، مع تكوين GAG رابطة بين البروتينات [9]. في هذه التجربة ، كانت الفئران المستخدمة قديمة ووزنها حوالي 680 جرامًا ، لذلك ، لم يكن من السهل إحداث انخفاض في وزن الجسم ، لكننا لاحظنا تناقص وزن الدهون وأعداد الخلايا الشحمية. كما هو الحال مع معظم الجليكوزامينوجليكان ، أدى كل من CaG و IQG إلى انخفاض مستويات المصل من العوامل المرتبطة بالالتهاب: الأحماض الدهنية الحرة ، AST (SGPT) ، الكرياتينين كيناز (وظيفة القلب ذات الصلة) ، الجلوكوز ، حمض اليوريك ، وارتفاع السكر في الدم المرتبط المستويات: الكوليسترول ، الكلي ، الدهون الثلاثية ، كوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة ، إلخ. انخفضت مستويات الأحماض الدهنية الحرة (الكبد الدهني المرتبط) للمجموعات المعالجة بشكل ملحوظ ، 36.7٪ في مجموعة CaG و 40.94٪ في مجموعة IQG. أيضًا ، انخفض مستوى sGPT (وظائف الكبد المرتبطة) بشكل كبير ، 51.58 في المائة في مجموعة CaG و 43.38 في المائة في مجموعة IQG.

البيانات التي تم إنشاؤها من تحليل ميكروأري الحمض النووي دعمتمكافحة الشيخوخةتأثير IQG ، مع تغييرات ذات مغزى في ملفات تعريف التعبير الجيني في فئران SD بعمر {{0} شهر تمت ملاحظتها بعد فترة علاج تبلغ 1- شهرًا. زادت الفئران المعالجة بـ CaG 5- ، مقارنةً بالمجموعة الضابطة ، في 131 جينًا ، بما في ذلك ليبوكالين 2 [33] ، وبروتين ربط السكاريد الدهني (Lbp) [34] ، ومثبط سيرين بيبتيداز ، كازال type3 (Spink3) [35] وينخفض ​​في 64 جينًا ، بما في ذلك ليسيل أوكسيديز (Lox) [36] ، سيرين ديهيدراتاز (sds) [37] ، وريتينول ساتوراز (ريتسات) [38]. تشير البيانات إلى الليبوكالين 2 والأديبوكينات ، اللذان تم تنظيمهما بشكل أعلى ، وأوكسيداز ليسيل (المرتبط بهيباراناز) ، الذي كان خاضعًا للتنظيم المنخفض ، كواسمات علاجية محتملة لـمكافحة الشيخوخةالآثار في الحيوانات البدينة.

لاحظت الدراسة الحالية تغييرات ذات مغزى في ملامح التعبير الجيني في الفئران المسنة بعد العلاج بـ CaG أو IQG لمدة شهر واحد. تم زيادة التعبير الجيني لليبوكالين -2 ، وهو مادة دهنية متورطة في مقاومة الأنسولين [39] وبروتين إفرازي مع ازدهار ربط الدهون ، بنحو 1 0 مرة. هذا يتفق مع دراسة ميكروأري التي أفادت بأن تناول فول الصويا يسبب زيادة في بروتين أميلويد شابيرون الداخلي المنشأ ، سينثيز بروستاغلاندين D2 من نوع ليبوكالين (Ptgds) ، مما يؤدي إلى كبت الأميلويد ومنع الخلل المعرفي [4 {{ 22}}]. يرتبط بروتين ربط عديد السكاريد الدهني (LBP) ، وهو علامة بديلة للانتقال الميكروبي ، بانخفاض الوظيفة الجسدية وزيادة الالتهاب [41]. تؤدي عملية الشيخوخة الطبيعية إلى تغيير نظام تخثر الدم لدى البشر. يمكن لمضادات التخثر الطبيعية ، بما في ذلك مضادات الثرومبين III ، والعامل المساعد الهيبارين الثاني ، والبروتين C ، والبروتين S ، ومثبط مسار عامل الأنسجة ، تعديل تفاعلات نظام تخثر الدم [42]. في هذه الدراسة ، كانت هناك زيادات كبيرة في العامل الأول (الفيبرينوجين) في CaG (162.6 بالمائة) ، IQG (146.0 بالمائة) ، و CS10 (184.0 بالمائة) - المجموعات المعالجة بالمقارنة مع المجموعة الضابطة المعالجة ببرنامج تلفزيوني. أيضًا ، تم تنظيم مستوى LBP (بروتين ربط LPS) في بيانات ميكروأري DNA الخاصة بنا ، مما يشير إلى أن الهيبارين (GAG) يرتبط بـ LBP ، ويسهل نقل LPS إلى CD14 ، ويعزز تنشيط LPS بوساطة خلايا الدم أحادية الطرف ، مما يؤدي إلى نشاط مضاد للتخثر [43]. تمت ترقية مثبط التربسين ، مثبط السيرين بروتياز Kazal-type 3 (Spink3) ، في هذه التجربة ، مما يشير إلى دور تعديل الباراكرين. كما أنها تشارك في زرع الأجنة [44]. نظرًا لأن Spink3 هو مثبط مهم للبروتياز السيرين ، فقد يعكس تنظيمه الأعلى آلية داخلية هامة للوقاية من الإصابة بالخلية تمنع حدوث المزيد من الإصابات [45]. قد يشير تقليل تنظيم lysyl oxidase إلى أن الهيبارين (GAG) الذي يثبط الارتباط المحكم لـ lysyl oxidase مع الألياف المشكلة مسبقًا قد تأثر بصعوبة [46]. إن تقليل تشبع الريتينول الذي شوهد في هذه التجربة جدير بالملاحظة ، حيث أن ريتينول ساتوراز يعزز تكوين الشحوم ويقلل من السمنة [47]. وفقًا لفرضية ، فإن كثافة الأنسجة الدهنية ، وهي مؤشر حيوي جديد يتنبأ بخطر الوفاة لدى كبار السن الذي لا يبدو أنه مرتبط بالالتهابات [48] ، علاوة على ذلك ، خفضت CaG بشكل كبير كثافة الدهون الواعدةمكافحة الشيخوخةوكيل.

الاستنتاجات

خنفساء الروث غليكوزامينوجليكان خفضت مستويات الكوليسترول والدهون الثلاثية في مصل الدم ، وتسببت في انخفاض وزن الأنسجة الدهنية وتطبيع مستويات الأحماض الدهنية الحرة ، و GPT ، والجلوكوز ، وحمض البوليك في الدم ، وإطالة زمن التخثر الذي من شأنه منع تراكم الدم والدهون تراكم في حواجز الأوعية الدموية البطانية التي تساهم في التوازن في الدورة الدموية. تم تقليل IL {0}} (pg / ml) في المصل بمقدار شهر واحد من علاج CaG أو IQG ، مما يدل على تأثير مضاد للالتهابات. بالإضافة إلى ذلك ، كان الجين الليبوكسين الواقي للكبد مرتفعًا (10- أضعاف) وتم تقليل تنظيم ليسيل أوكسيديز (0. 1- أضعاف) في الفئران المعالجة بـ CaG. CaG المشتقة من الحشرات يمكن أن تكون أ

بديل أكثر أمانًا للهيبارين و GAGs الأخرى من مصادر الثدييات ، حيث تقلل مصادر الحشرات من إمكانية انتقال الفيروسات المعدية من الحيوانات مثل الخنازير. تشير هذه النتائج إلى أن CaG و BIQ لا يمكن أن يكونا طبيعيين فقطمكافحة الشيخوخةالعوامل ولكنها أيضًا أغذية وظيفية ، على غرار الشيتوزان والمواد الحيوية المستقبلية - تلعب دورًا حيويًا في حياتنا اليومية.

الاختصارات

ALP: الفوسفاتيز القلوي ؛ ALT (GPT): إنزيم غلوتامات بيروفات ترانساميناز ؛ aPTT: تنشيط وقت الثرومبوبلاستين الجزئي ؛ AST (GOT): إنزيم ناقلة أمين أوكسالو أسيتات الجلوتامات ؛ BUN: نيتروجين اليوريا في الدم ؛ CaG 5: خنفساء الروث (Catharsius molossus) glycosaminoglycan 5 مجم / كجم ؛ CK: فوسفوكيناز الكرياتينين ؛ CON: مجموعة التحكم ؛ CRP: بروتين سي التفاعلي ؛

CS10: كبريتات شوندروتن (10 مجم / كجم) ؛ GAG: جليكوزامينوجليكان ؛ GGT: - ترانسفيراز الجلوتاميل ؛ حاء الكوليسترول: ارتفاع نسبة الكوليسترول في الدم. IQG5: Queen of Bombus ignitus (نوع من النحل الطنان) glycosaminoglycan 5 مجم / كجم ؛ لتر كول: انخفاض الكولسترول. LDH: نازعة هيدروجين اللاكتات ؛ PT: وقت البروثرومبين. T. الكوليسترول: الكوليسترول الكلي. TG: الدهون الثلاثية

شكر وتقدير

يعترف المؤلفون بالأكاديمية الوطنية للعلوم الزراعية للدعم المالي (RDA ، PJ011853) والدعم الفني.

التمويل

وقد تم دعم هذا العمل من خلال مشروع البحوث الأساسية لإدارة التنمية الريفية ، PJ011853.

توافر البيانات والمواد

جميع البيانات متاحة على بوابات المجلة في المخطوطة المقدمة. لا توجد ملفات / بيانات داعمة أخرى مطلوبة مع هذا الإرسال.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة.

مساهمات المؤلفين

أجريت معظم التجارب ، وأعدت المخطوطة: تصور الدراسة ، وشاركت في تصميمها وتنسيقها ، وجمعت البيانات وحللتها ، وأعدت المخطوطة. أجرى BJ الدراسات على الحيوانات ، وشارك في مقايسة الإنزيم المؤكسد. أجرى HJ فحوصات السيتوكين. شارك JS في محاذاة التسلسل الجيني. شارك KK في ميكروأري DNA. أجريت دراسة في الجسم الحي لاستجابة الشريان المقاوم. كل الكتاب قراءة وافقت على المخطوط النهائي.

الموافقة على النشر

لا تحتوي هذه المخطوطة على بيانات أي فرد بأي شكل من الأشكال.

موافقة الأخلاق

تمت الموافقة على الدراسات التي تشمل الحيوانات من قبل اللجنة الأخلاقية لحيوانات المختبر التابعة للأكاديمية الوطنية للعلوم الزراعية ، RDA ، كوريا الجنوبية (NAAS1503).

لم تحتوي تقارير دراسات المخطوطات على مشاركين بشريين أو بيانات بشرية أو أنسجة بشرية.

ملاحظة الناشر

تظل Springer Nature محايدة فيما يتعلق بالمطالبات القضائية في الخرائط المنشورة والانتماءات المؤسسية.

تفاصيل المؤلف

1 قسم البيولوجيا الزراعية ، الأكاديمية الوطنية للعلوم الزراعية ، إدارة التنمية الريفية (RDA) ، وانجو جون 55365 ، كوريا الجنوبية. 2 كلية الصيدلة ، جامعة آجو ، سوون 442-749 ، كوريا الجنوبية. 3Pharmacogenechips Inc. ، Chuncheon 200-160 ، كوريا الجنوبية.